Construção e Validação de um plasmídeo para ensaios de fenotipagem do HIV-1 através de Luminescência

Resumo

Objetivo: O objetivo desses estudos foi a construção de um vetor de recombinação para a Integrase do HIV-1 contendo o gene repórter da luciferase, visando a geração de vírus recombinantes que possam ser utilizados em ensaios de fenotipagem com inibidores da integrase. Métodos: Neste trabalho, o vetor pNL4-3Luc foi manipulado molecularmente para deletar o gene da integrase e construir um vetor para recombinação de integrases de diferentes subtipos de vírus. Resultados: Como resultados, os vírus com as integrases recombinantes foram gerados nas células HEK293T transfectadas com os plasmídeos, apresentando níveis significativos de luminescência. Após a purificação das partículas virais produzidas, linfócitos suscetíveis foram infectados com os vírus contendo as integrases recombinantes e houve a detecção de luminescência tanto nas integrases oriundas do HIV-1 subtipo B quanto do subtipo C. Conclusão: A observação da emissão de luz de células infectadas por vírus com diferentes integrases pode ser um método eficiente para avaliar a suscetibilidade desses vírus na presença de inibidores específicos para a integrase do HIV-1.